فاطمه یوسفی، زهرا شبانی‌نژاد، بهرام محمدسلطانی
*، مهرداد بهمنش
1 گروه ژنتیک مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
چکیده
زمینه: سرطان یکی از مهم‌ترین عوامل تهدید کننده سلامت محسوب می‌شود. توسعه روش‌های درمانی مبتنی بر فرایند‌های RNA های تداخل‌گر (RNAi) نتایج قابل قبولی را به دنبال داشته است. یکی از مهم‌ترین مشکلات سیستم‌های siRNA، پایداری کم آن می‌باشد. از جمله راهکارهای غلبه بر این ضعف، معرفی انواع مختلفی از RNAهای سنجاق‌سری یا shRNA بوده‌است. ژن OCC-1 (Overexpressed in Colon Carcinoma) دارای رونوشت‌های متعددی می‌باشد که به عنوان مشخصه سرطان کولورکتال در نظر گرفته شده است. این ژن نقش مهمی در ایجاد و پیشرفت سرطان کولورکتال از طریق مسیرهای پیام‌رسان سلولی دخیل در تکثیر سلولی دارد. در تحقیق حاضر از روش RNA تداخل‌گر یا RNAi به منظور کاهش بیان رونوشت ویژه‌ای از ژنOCC-1 استفاده شده است.
روش کار: سازه‌خاموش‌گر طراحی شد و سپس در ناقل بیانی pRNA-H1.1/Neo که دارای پروموتر برای RNApolIII می‌باشد، کلون گردید. پلاسمید در رده سلولی سرطان کولورکتال ترانسفکت گردید و بیان رونوشت OCC-1 در زمان‌های 24 و 72 ساعت بعد از ترانسفکشن نسبت به نمونه کنترل با روش Real-time PCR مورد بررسی قرار گرفت.
یافته ها: بیان رونوشت OCC-1 در زمان 72 ساعت بعد از ترانسفکشن، نسبت به نمونه کنترل حدود 25 درصد کاهش یافت.
نتیجه‌گیری: نتایج نشان می‌دهد سازه shRNA طراحی شده به صورت موفقیت‌آمیزی باعث کاهش بیان ژن مورد هدف شده است که با توجه به نتایج می‌توان از آن در مطالعات آینده به منظور کشف تاثیر این رونوشت بر ایجاد یا پیشرفت سرطان کولورکتال، استفاده نمود.