طراحی یک روش مولتیپلکس پی سی آر برای شناسایی باکتری های شایع عامل عفونت های تنفسی

چکیده

زمینه و اهداف:پنومونی بوسیله طیف وسیعی از باکتری ها و ویروس ها ایجاد می‏شود. پنومونی اکتسابی از جامعه، یک عامل برجسته بیماری در جوامع مختلف است. پنومونی باکتریال از نظر نحوه ابتلا به دو دسته تقسیم می‏شود: پنومونی‏های اکتسابی از بیمارستان و پنومونی های اکتسابی از جامعه.استافیلوکوکوس‏اورئوس و کلبسیلا‏پنومونیه از شایع ترین عوامل پنومونی های اکتسابی از بیمارستان هستند و استرپتوکوک پنومونیه و مایکو‌باکتریوم‌توبرکلوزیس باکتری‏های شاخص پاتوژنی می باشند که عامل پنومونی‏های اکتسابی از جامعه هستند. هدف از انجام این مطالعه تشخیص عوامل عفونی ذکر شده از طریق مولتیپلکس پی سی آر (Multiplex Polymerase Chain Reaction)می باشد. مواد و روش ها: مولتیپلکس پی سی آر روش مولکولی دقیق و سریعی است که برای تشخیص هم زمان دو یا چندین ژن اختصاصی در یک واکنش بکار می رود. این مطالعه از نوع توسعه تجربی می باشد در آن از روش مولتیپلکس پی سی آر برای تشخیص همزمان سکانس های اختصاصی ژنوم عوامل برجسته پنومونی (استرپتوکوکوس پنومونیه، مایکو‌باکتریوم‌توبرکلوزیس، استافیلوکوکوس‏اورئوس و کلبسیلا‏پنومونیه) بهره می گیریم. ژن های اختصاصی که ما در این مطالعه انتخاب کردیم:پنومولیزین برای استرپتوکوکوس‏پنومونیه، ترمونوکلئاز برای استافیلوکوکوس اورئوس، ژیراز برای کلبسیلا پنومونیه و pncA برای مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می‏باشند. همچنین ما در این مطالعه از ژن 16s ریبوزومی بعنوان کنترل مثبت استفاده کردیم. یافته ها: بعد از ست کردن روش و مشاهده¬ی باندهای اختصاصی، جهت تایید نهایی باندهای مورد نظر از ژل استخراج گردید و برای تعیین توالی (Sequencing) فرستاده شد.نتایج مطالعه ما نشان داد که تشخیص همزمان استرپتوکوکوس‏پنومونیه، استافیلوکوکوس اورئوس، کلبسیلا پنومونیه و مایکو‌باکتریوم‌توبرکلوزیس در یک واکنش پی سی آر میسر می‏باشد. نتیجه گیری: در واقع می‏توان از این روش در تشخیص مستقیم و همزمان این عوامل در نمونه‏های تنفسی بهره‏گیری کرد.

کلید واژه ها: مولتیپیلکس پی سی آر, عفونت های تنفسی, استرپتوکوکوس پنومونیه, مایکوباکتریوم توبرکلوزیس, استافیلوکوکوس اورئوس و کلبسیلا پنومونیه