چکیده
زمينه و اهداف: قارچ كپكي آسپرژيلوس نيجر به عنوان بيوراكتور عمده و ميكروارگانيسم پاتوژن، آلرژن و آلوده كننده مواد غذايي مورد توجه بوده و با عنايت به افزايش موارد استفاده از اين ميكروارگانيسم به عنوان بيوراكتور، اهميت آن رو به تزايد است. بنابراين، كلونينگ و تعيين توالي ژن تانين آسيل هيدرولاز يا تانناز جهت بررسي و آناليز ويژگي هاي ژن سنتز كننده تانناز در اين ميكروارگانيسم و مقايسه خصوصيات ژن و فرآورده آن با همان ژن ساير ميكروارگانيسم ها و در نهايت، تلاش براي بيان ژن و توليد محصول انجام شد، زيرا تانناز در تهيه و عمل آوري مواد غذايي، نوشابه ها و شربت ها در صنايع غذايي كاربرد دارد و در صنايع داروسازي نيز به عنوان ماده تجاري عمده براي ساخت تري متوپريم به كار مي رود.
روش بررسي: DNA ژنومي يك نمونه از آسپرژيلوس نيجر به شماره ثبت 404N كه مشتق از آسپرژيلوس نيجر 9029 ATCC است، براي استخراج DNA و انجام مراحل بعدي مورد استفاده قرار گرفت و با استفاده از PCR دژنراتيو، يك قطعه اوليه از ژن تانناز به طول bp990 به دست آمد. قطعه ژن حاصله، متعاقب استخراج از ژل، خالص سازي و به وكتور مناسب پيوند زده شد و پس از ترانسفورماسيون، از سلول ميزبان استخراج و تلخيص شد و توالي نوكلئوتيدي آن تعيين گرديد.
يافته ها: آناليز توالي محصول PCR دژنراتيو با بلاست X BLASTX، درسطح اسيدنوكلئيك همساني بسيار زياد اين توالي را با توالي ژن تانناز در آسپرژيلوس اريزه آ، آ. آواموري و آ. اكلئوتوس نشان دادند (52 - 64% ). كلونينگ و تعيين توالي ژن كامل تانناز در آ. نيجر و سپس بيان ژن و تهيه آنزيم در اشل صنعتي براي استفاده در صنايع داروسازي براي مراحل آتي اين پژوهش مد نظر است.
نتيجه گيري: وجود ژن تانناز در ژنوم آسپرژيلوس نيجر و همساني بسيار بالاي قطعه تعيين توالي شده با ژن تانناز ساير ميكروارگانيسم ها ي داراي قرابت فيلوژنيك با اين قارچ نشان دهنده انتقال محافظه كارانه آن در مسير تكاملي از ژنوم دودماني است. توالي نوكلئوتيدي حاصله مي تواند براي كلون كردن ژن كامل تانناز، تعيين توالي ژن كامل و نهايتاً براي بيان ژن و توليد محصول مورد استفاده قرار گيرد.