چکیده
زمينه و اهداف: پاراكوويروس انساني جزو خانواده پيكورناويريده مي باشد. همه ويروس هاي اين گروه داراي يك پروتئاز مهم 3C مي باشند كه در پردازش پروتئين و تكثير ويروس رل مهمي دارد. بدين جهت اين تحقيق براي بررسی پردازش پلي پروتئين در پاراکو ويروس انسانی تيپ يک به روش كلونينگ وبيان ژن 3C طراحي گرديد.
روش بررسی: ناحيه کد کننده پروتئين 3C از cDNA تهيه شده از ژنوم پاراکو ويروس انسانی تيپ يک در پلاسميد pUBS با آنزيم ليگاز وارد و پلاسميد نوترکيب تهيه گرديد. پس از انتقال پلاسميد و تکثير آن در باکتری به طريق استخراج با فنل DNA جدا شد. و سپس در سيستم پروکاريوتی و روش درون لوله ای تحت پروموتور T7 بيان گرديد. نتايج با پلي آكريل آميد ژل الكترو فورز بررسی شد.
يافته ها: با بررسی محصول بيان پلاسميد نوترکيب فاقد ژن 3C در هر دو سيستم پروکاريوتی و درون لوله ای فقط يک باند بزرگ هم اندازه محصول اوليه ترجمه مشاهده گرديد. در صورتيکه وقتی محصول بيان پلاسميد نوترکيب حاوی 3C در هر دو سيستم توسط پلی آکريل آميد ژل بررسی شد، بجای يک باند بزرگ، چندين باند کوچک مشاهده شد که كوچكتر از محصول اوليه تر جمه بودند كه دلالت بر خاصيت پروتئازی پروتئين 3C می کند. در ضمن براي اثبات نتايج آنتی پروتئاز به محصول پلاسميد حاوی ژن 3C اضافه گرديد، نتيجه مشابه محصولات حاصل از بيان پلاسميد فاقد ژن 3C بود.
نتيجه گيری: نتايج نشان مي دهد که پاراکو ويروسهای انسانی تيپ1 از نظر فعاليت پروتئوليتيکی متفاوت از ديگر پيکورنا ويروسها می باشند و در اين ويروسها فقط پروتئين 3C دارای خاصيت پروتئازی بوده و کليه کليواژهای و پردازش پلی پروتئين اوليه كه حاصل ترجمه ژنوم RNA ويروس است توسط اين پروتئاز انجام می شود.