زهرا مرادی نبرین
1، جعفر مجیدی
2*، لیلی عاقبتی ملکی
2، توحید کاظمی
2، جلال عبدالعلی زاده
3، سمیه داداشی
2، صادق عیوضی
2، مجید احمدی
2، نعیمه مجیدی ذوالبنین
41 شعبه ارس دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران
2 گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران
3 آزمایشگاه ایمونولوژی مرکز تحقیقات دارویی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران
4 گروه فارماکولوژی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران
چکیده
زمینه: هدف از این مطالعه تخلیص ساب کلاس IgG2a موش می باشد محصولی که برای ایمونیزاسیون حیوانات دیگر جهت تولید هیبریدوماها در پروسه تولید آنتی بادیهای مونو کلونال و تولید آنتی بادیهای پلی کلونال به کار می¬رود.
روش کار: در قدم نخست کروماتوگرافی تعویض یونی (Ion exchange chromatography) برای تخلیص IgG موش و در مرحله بعد افینیتی کروماتوگرافی با پروتئین ProA) A) برای تخلیص ساب کلاس IgG2a موش به کار برده شد. بعد از هر مرحله تخلیص روش الکتروفورز SDS-PAGE برای تایید خالص سازی به کار رفت. در مرحله آخر تایید ساب کلاس آنتی بادی خالص شده با کمک کیت تعیین ایزوتایپ صورت گرفت.
یافته ها: رسوب ایمونوگلوبولین های موشی با غلظت mg/ml 27 به مقدار 3 سی سی روی ستون افینیتی کروماتوگرافی Ion exchange برده شد. مقدار محصول IgG از ستون تعویض یونی Ion exchange) ) 28 میلی گرم و مقدار محصول IgG2a ستون ProA، 8 میلی گرم بود. در نتایج الکتروفورز SDS-PAGE در حالت احیا دو باند در موقعیت وزن مولکولی 25 و 50 کیلودالتون( KDa) مشاهده شد. تعیین ایزوتایپ محصول به دست آمده وجود IgG2a با زنجیره سبک کاپا را تایید کرد.
نتیجه گیری: در این مطالعه محصول IgG2a با خلوص بالای 95% به دست آمد. خلوص بالای محصول به دست آمده نشان می¬دهد که کروماتوگرافی تعویض یونی و به دنبال آن کروماتوگرافی با ProA روش مناسبی برای تخلیص ساب کلاسهای IgG موش با کیفیت و خلوص بالا می¬باشد. تولید این محصول مناسب و اقتصادی با درجه خلوص بالا قدمی به سوی اسقلال کشور است.